基因工程T细胞已经成为治疗B细胞恶性肿瘤的重要方法。CAR - T细胞的常见应用是治疗过表达细胞外标记物的B细胞恶性肿瘤。嵌合抗原受体(CAR)T细胞是一种新型细胞疗法，其中自患者体内收获自体T细胞并进行基因修饰以表达嵌合抗原受体。测量载体整合到T细胞基因组的效率对于评估这些癌症免疫疗法的效力和安全性是很重要的。

       分享的此文章主要是利用ddPCR检测溶液中空载体的浓度和整合到T细胞群中的CAR和TCR载体的平均数量。ddPCR检测到的平均每个细胞的载体拷贝数与流式细胞术检测到的细胞转导比例呈线性关系。使用ddPCR与Real-time PCR的绝对定量精度比较表明，ddPCR明显更精确，测量的差异减少了7倍，文中通过一些数据的比较说明了ddPCR具有更高的准确性和稳定性。

图1

       首先使用ddPCR对空载体的检测上下限进行了分析，分析结果如图1所示，由实验结果可知其检测下限可达到0.13 copies/μl，检测上限可达到1×10⁴copies/μl。

图2

       其次使用表达HPV-16 E7的T细胞产生的慢病毒载体进行ddPCR载体拷贝数的动态范围测定，图2则是对在不同的稀释程度下对其载体拷贝数和稀释度的关系进行了分析，可以看出每个细胞的载体拷贝数与流式细胞术检测到的细胞转导比例呈线性关系。

       为了评估ddPCR的可重复性以及稳定性，设计了不同时间点和不同人员检测是否存在差异性等相关试验;由图3可知，在不同时间点以及不同人员的检测结果差异不显著。说明使用ddPCR检测的重复性高且稳定。

图3

       文中使用ddPCR测定法通过不同的工作人员获得了类似的载体拷贝数测量结果，突出了该测定法在技术人员之间的可重复性。对新鲜的和冷冻保存的CAR T和TCR工程改造的T细胞进行的分析得出了相似的结果。说明ddPCR是一种准确定量CAR和TCR工程T细胞中平均载体拷贝数的强大工具。该试验也适用于其他类型的基因工程细胞，包括自然杀伤细胞和造血干细胞。

       ClarityTM超快速数字PCR系统采用毛细管虹吸原理的超微芯片，保证DNA分子均匀分布至每根毛细管，实现DNA的单分子扩增，极大地促进DNA分子的扩增效率。数字化芯片由15,000根两端通透的毛细管组成，独特的结构极大地保证了样本的快速稳定上样和分区，确保检测结果的准确性。基于该平台开发了RCL DNA残留检测试剂盒(数字PCR-荧光探针法)。

       该试剂盒适用于以慢病毒或逆转录病毒生产的Car-T治疗产品中检测Car-T产品中是否有复制型病毒RCL/RCR的污染。

       本试剂盒采用的是探针法，以逆转录病毒包膜质粒(pVSV-G)作为阳性标准品，在检测时可做为阳性对照。检测下线可达到0.325 copies/µl，检测动态范围为0-2240 copies/µl。包含成熟的反应体系和SOP流程，无需实验的前期优化，可实现“一步到位”式操作。在95%置信区间内，不同样本两重复孔CV值均<10%，重复性好。同时可提供整套RCL/RCR病毒检测的免费技术培训，协助客户解决检测实验中所遇问题。欢迎广大客户前来咨询!