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ASMS报道第三弹——来听听客户视角下的Evosep体验
来源:大分子生物网站 | 作者:Neoline | 发布时间: 2021-05-11 | 1296 次浏览 | 分享到:
在美国质谱年会(2020 ASMS)会议上,Evosep邀请了合作质谱厂商Dr. Gary Kruppa, Dr. Emily Chen和Dr. Linfeng Wu分享了在基于Evosep One和各家质谱在高通量蛋白组学上的新数据,包括了鉴定数,CV值,重复性等。

  在美国质谱年会(2020 ASMS)会议上,Evosep邀请了合作质谱厂商Dr. Gary Kruppa, Dr. Emily Chen和Dr. Linfeng Wu分享了在基于Evosep One和各家质谱在高通量蛋白组学上的新数据,包括了鉴定数,CV值,重复性等。这些数据更有力地说明了Evosep One在大队列样本的优越性(文末有视频回放干货)。

  


  Evosep Mass Spec Vendor Update讲者信息

  part1

  EVOSEP One 与新兴dia-PASEF技术的碰撞

  Dr. Gary Kruppa分享了Evosep One在dia-PASEF技术上的最新数据。

  文章思路:研究者分别采用PASEF方法(Hela样本分级24个馏分)和dia-PASEF方法(Hela样本)共同来构建Hybrid Library。

  


  以下为Evosep One使用的方法和条件。

  


  实验结果:(1)dia-PASEF方法下,200 ng Hela样本,在Evosep One 60 samples/day的方法下,鉴定得到5204蛋白数。

  


  (2)对于大队列研究而言,需要保障数据结果的蛋白鉴定数,重复性及稳定性。可以从下图数据中看出,Evosep系统对数据的CV值拥有良好的保障。

  


  PART2

  Evosep One搭配Orbitrap exploris 240实现UHTPPP解决方案

  血液为常见的临床样本研究类型,但由于其蛋白丰度高且多、动态范围宽等增加了分析的难度。Dr. Emily Chen分享了Evosep One搭配Orbitrap exploris 240实现了Ultra High-throughput Plasma Protein Profiling (UHTPPP)的解决方案设计。

  具体流程图如下图:

  


  Evosep One在其中的优异性能:

  (1)选择Evosep One 60 samples/day 的方法,进行连续5天的血清样本(每天检测20份样本)检测, 其鉴定数重复性优良。且Evosep One显示出来优异的CV(加标到每个样品中的PRTC peptides保留时间CV <6%)和优越的质量精度(小于5 ppm)。

  


  (2)分别使用Evosep One的不同方法,上样500份血浆样本,可以看到其不同的上样量下的蛋白鉴定结果数,同时,下右图的数据也进一步佐证了仪器带来CV的优越性。

  


  PART3

  EVOSEP One 在Agilent 6495 Triple Quadrupole上实现稳定靶向蛋白组学分析

  Dr. Linfeng Wu 分享了Evosep搭配Agilent 6495 Triple Quadrupole的最新靶向应用,使用MRM方法分析了人血浆蛋白重现性、稳健性和分析灵敏度。

  


  Evosep One方法如下:

  


  结果:(1)仪器稳定性测试

  连续注射1μg加入平衡SIS肽混合物的人血浆574次,其保留时间显示出良好的重复性。

  


  选择4种蛋白质生物标记物相匹配的四种选定肽的MRM峰面积,RSD分别为6.5、7.0、7.9和6.0%,n=574),其RT同样具有良好的重复性(RSD=0.69、0.80、1.04和0.59%,n=574)。

  


  (2) 血浆中蛋白质定量的灵敏度测试

  在稳健性试验前后测量标准曲线,两种标准曲线的检测限(LOD)均为4amol,定量下限(LLOQ)均为10amol,两条标准曲线的R2分别为0.9987和0.9998。

  


  本次推文总结了Evosep One与三大质谱厂家的最新应用报道,可以看出Evosep One在与不同类型质谱联用时,都能展现出其极高的通量,良好的系统稳定性和灵敏度。并且,Evosep公司在发展的路上一直与合作伙伴紧密联系,从而共同助力蛋白组学的发展。

  

       小tip

  这里罗列了目前可以匹配的离子源。

  


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