支原体检测技术及应用指南(药典法和快检法)
Why(检测原因)概述、分类来源、危害
检测方法: 培养法,指示细胞培养法,NAT法(核酸快检)申科
重点介绍:NAT法
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欧洲 |
UK |
USA |
日本 |
中国 |
巴西 |
阿根廷 |
药品审批管理机构 |
人用药品委员会(CHMP) |
由MHRA进行国家审批由EMA进行集中审批 |
食品药品管理局(FDA) |
药品与医疗器械管理署(PMDA) |
中国国家食品药品监督管理局(NMPA) |
国家卫生监督局(ANVISA) |
药品管理局(ANMAT) |
出版药典 |
质量管理局 (EDQM) |
英国药典委员会 |
美国药典委员会 |
药品与医疗器械管理署(PMDA) |
国家卫生监督局(ANVISA) |
巴西国家卫生监督局(ANVISA) |
药品管理局(ANMAT) |
药典 |
欧洲药典(EP) |
英国药典 |
美国药典(USP) |
日本药典(JP) |
巴西药典 |
巴西药典 |
阿根廷药典 |
支原体检测的NAT认可 |
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不明确 |
没有描述 |
没有描述 |
NAT验证要求的相关标准 |
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不明确 |
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不同国家对NAT用于支原体检测的接受程度及NAT验证的质量标准要求
NAT方法从检测限(LOD)、特异性、稳定性、可比性等方面进行验证。
验证服务
培养法:样品检测、培养基灵敏度检查、适用性验证
指示细胞培养法:样品检测、适用性验证
qPCR法:样品检测、方法验证、适用性验证
全面性能验证
验证内容:不同的样本基质,不同的宿主细胞DNA,不同的蛋白浓度
结果:符合国内外法规要求50%-150%
案例分享
1. 移液枪的选取
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2. 正向移液需要润洗吸头
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3. 阴性质控有污染,如何进行环境控制?
a. 实验时穿实验服并戴口罩,勤换手套。
b. 使用带滤芯移液枪头和灭菌EP管,每次实验尽量更新新的枪头和EP管。
c. 分区操作
d. 空调开启时,可在实验开始前先开启空调预冷实验室,待进行实验时,将空调风速调至最低。
e. 实验过程中先准备阴性对照管、样品管并盖紧管盖,最后准备阳性对照管。
f. 勿将扩增产物带至PCR反应液配置区。
g. 实验结束后清理桌面,可以用DNA清除剂清理环境。
4. 不同实验操作要隔开,避免气溶的产生。
可能存在的问题:
1. 稀释导致支原体实际含量低于试剂盒检测限。
解决:使用Clarity数字PCR可以很好的解决稀释问题,检测的动态范围是0-2240 copy/μl。
2. 检测样本的PH值是否验证(如培养基过酸过碱会有影响吗?)
解决:Clarity数字PCR检测的总体系是15μl,体系小所加的样本量更少,同时进行分区后在一定程度上将样本进行了稀释,因此样本中其他因素的影响极小。
2022-05-05
2022-04-14
2022-04-12
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