中国团队：首次基于Simoa平台检测单囊胚培养液中细胞因子水平

　　来自深圳中山泌尿外科医院的研究者，基于Simoa平台同时检测单囊胚培养液中IL-6、IL-10、TNF-α三种细胞因子水平，并对比其与胚胎质量及定植结果的关系。

　　01、背景

　　在体外培养过程中，在着床前胚胎会向胚胎培养基中分泌一些细胞因子，如IL-6、IL-10、TNF-α，这些细胞因子水平可能对胚胎发育潜能或妊娠结局有预测作用。本研究旨在利用SIMOA平台检测单个囊胚条件培养液(single-blastocyst conditioned medium,SBCM)中IL-6、IL-10和TNF-α的浓度，并探讨这三种细胞因子浓度与胚胎质量及后续胚胎移植结局的关系。

　　单位：深圳中山泌尿外科医院

　　02、研究方法

　　2组样本：第一组，38个SBCM样本，比较IL-6、IL-10、TNF-α水平与囊胚质量(优质和非优质)、囊胚形成时间(D5和D6)的关系;第二组：61个D5移植的优质囊胚SBCM样本，比较IL-6水平与胚胎是否成功植入(植入和未植入)的关系。

　　从IVF / ICSI周期中收集30uLSBCM样本，排除标准如下：(a)女性年龄> 38岁;(b)接受ART治疗多于一个周期;(c)微刺激方案;(d)在第3天(D3)少于4个来自2PN正常受精卵的优质(TQ)胚胎，(e)接受单基因疾病和PGT-A的植入前遗传学诊断。

　　胚胎质量评分，经形态学评分，分为优质囊胚(top-quality, TQ)和非优质囊胚(non-top quality, NTQ)。

　　经阴道超声观察子宫内的孕囊确定是否植入成功。

　　基于全自动SimoaHD-1平台检测SBCM样本中的IL-6、IL-10、TNF-α水平，试剂盒是SIMOACytokine 3-plex A kit，IL-6、IL-10、TNF-α的检测限分别是0.0060pg/ml,0.0022pg/ml, 0.0110pg/ml。

　　03、结果

　　第一组38个样本中，IL-6，IL-10，TNF-α检出率分别为 100% (38/38), 50% (19/38), 63% (24/38)，用于数据分析的样本数量分别为 38，16，24。结果表明，TQ与NTQ的IL-6、IL-10和TNF-α浓度无显著性差异(图1 a-c);D6与D5相比具有更高的IL-6浓度(图 1d)，而D5和D6之间的IL-10和TNF-α浓度没有显着差异(图1e.f)

　　图1. 来源于不同质量(TQ和NTQ)囊胚或形成时间(D5和D6)囊胚的SBCM中IL-6、 IL-10和TNF-α浓度 NS，不显著，*P<0.05

　　38个SBCMs中的IL-6浓度在各亚组中进行分析，如图2所示，D6-TQ囊胚SBCM中IL-6的浓度明显高于D5-TQ囊胚(P<0.05 )。此外，Spearman分析显示SBCM中IL-6浓度与D5囊胚的胚胎质量呈显著负相关，而与D6囊胚的胚胎质量则呈显著正相关.

　　图2. 各亚组间SBCM中IL-6的浓度的比较。D5-TQ，第5天优质胚胎;D5-NTQ，第5天非优质胚胎;D6-TQ，第6天优质胚胎;D6-NTQ，第6天非优质胚胎。NS，不显著;*P<0.05

　　为探讨IL-6对胚胎移植潜能的预测价值，从D5移植的单个TQ囊胚中收集61个SBCMs样本，根据胚胎移植结果进行分析。两组的人口统计学特征，包括年龄、体重指数、不孕持续时间、Gn剂量、原发性不孕比例和ICSI均无无显著差异。源自植入成功与植入失败两组胚胎SBCM的IL-6浓度无显著性差异(图3)。

　　图3. 植入和未植入胚泡的SBCM中IL-6的浓度

　　04、结论

　　成囊时间不同的囊胚SBCM中IL-6浓度与囊胚质量有关。然而，SBCM中IL-6的浓度可能与囊胚植入潜能无关。

　　参考文献：Huixian Zhong, Qing Sun, PeilinChen, et al. Detection of IL-6, IL-10,and TNF-α level in human single-blastocyst conditioned medium usingultrasensitive Single Molecule Array platform and its relationship with embryoquality and implantation: a pilot study. Journal of Assisted Reproduction andGenetics. May 2020.

　　Simoa细胞因子试剂盒(部分)

　　目前推出的Simoa试剂盒有 80+ 种，常见的细胞因子均有，有单重也有多重试剂盒，检测物种有人和小鼠。灵敏度均在fg/ml 级别，节约样本，数据可靠。以下列出了部分人的细胞因子试剂盒: